timi天美传孟若羽

　　任何进入本室进行膜片钳实验的人员，必须经过本室专门人员培训合格认可后，经允许方可进行膜片钳放大器、拉制仪、切片机等仪器的操作。

　　在实验过程中，必须严格按照实验流程进行操作，不得擅自更改操作步骤，不许自行调改仪器设置，以免造成仪器毁损。

　　统一安排实验时间，使用仪器后作登记。

　　脑片制作流程：

　　一、 配制蔗糖溶液(0~4°C)和NaCl孵育液(室温，20~25°C)各1L。

　　二、 麻醉动物：爪蟾—MS-222，大鼠—乌拉坦。

　　三、 解剖动物，取脑组织。

　　四、 用丙酮浸泡刀片30 min。

　　五、 切片：根据不同的动物和组织选择不同的方案。

　　方案一：低熔点琼脂包埋组织后进行切片

　　方案二：普通琼脂作托进行切片

　　六、 蔗糖溶液中处理脑片40min。

　　七、 NaCl溶液中孵育脑片0.5~1h后可进行膜片钳实验。

　　脑片制作过程需全程通入95%翱2+5%颁翱2混合气。

　　拉制仪操作流程：

　　采用两步法拉制玻璃微电极。

　　一、 打开电源POWER(-)，预热10min。

　　二、 调节拉制参数。

　　第1步拉制参数：将左侧旋钮旋置NO.1 HEATER，再旋转右侧第一个旋钮NO.1 HEATER ADJ，调到所需参数。

　　第2步拉制参数：将左侧旋钮旋置NO.2 HEATER，再旋转右侧第二个旋钮NO.2 HEATER ADJ，调到所需参数。

　　调节参数过程的动作要迅速，持续时间不宜过长。

　　三、 将左侧旋钮置于STEP2位置。

　　四、 安装电极，将加热丝旋到上方，按START，完成第一步拉制。

　　五、 待加热丝完全变暗后，将加热丝旋下，按START，完成第二步拉制。

　　六、 重复步骤四、五，可拉制相同参数下的电极。

　　七、 关闭电源POWER(○)