流式细胞术(flow cytometry,FCM)是利用流式细胞仪对生物颗粒包括细胞、血小板、微生物以及人工合成的微球等进行多种物理和生物学特性定量分析,并能对特定的细胞群加以分选的一种细胞参量分析技术。BD FACSAria流式细胞分选仪为流式细胞仪高速分选和多色分析技术设定了更新更高的标准。仪器的设计采用全新理念,极大地简化了高速分选和多色分析的操作和实验要求。
一、激光器配置
Laser1:488nm Coherent Sapphire solid state 13mW-20mW
laser2:633 nm JDS Uniphase HeNe air-cooled 10mW-20mW
Laser3:407 nm Point Source Violet solid state(for Hoechst znd DAPI010MW-17mW .
二、主要应用
流式细胞仪对细胞悬液进行快速分析,通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测,得到该细胞的光散射和荧光指标,分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。 本室购进的BD FACSAria流式细胞分选仪使用石英杯流动检测池固定光路校准技术。仪器内置的BD AccuDrop系统可以快速准确地确定液滴延迟时间。主要用于微生物分析,细胞分选,细胞凋亡、DNA 分析(如DNA 倍体)、细胞周期分析,细胞内标记,造血干细胞的检测、细胞膜表面标记、细胞生理学研究和液相蛋白定量分析等等。
叁、目前使用范围
1. 细胞的免疫检测(测定T细胞、B细胞、NK细胞等细胞亚群的 含量)
2. 细胞周期分析
3. 细胞分选
4. 细胞凋亡分析
四、操作方法
(一)样品准备
(二)开机程序
1.安装合适的喷嘴(70um或100um)喷嘴至少要达到分选颗粒直 径的三倍大小。
2.开启仪器电源,并确保激光器处于关闭状态。
3.打开流动检测池上盖。
4.启动激光器,等待20分钟使它预热,10分钟时可继续步骤5。
5.打开电脑,在登陆页面输入用户名和密码,观察桌面右下角的 网络连接图标是否显示仪器。
6.检查仪器窗口底部的液流系统水平:如果需要,则充满液体或 倾空液体。
7.在FACSDiva软件的“Instrument(仪器)”菜单中,选择“Fluidics Startup'选项:并在提示下单击OK键。
8.当“启动液流系统”程序完成后,使用控制软件来开启液流。
9.打开分选区门,检查位于废液吸引器中的液流的位置,并检查 液流断点窗口中的液流情况。
10.关闭分选仓门和流动检测池上盖。
11.如果需要,在“Sort菜单中选择”High Sort Setup(高速分选设置)“选择设置鞘液压力。
(叁)关机程序
1.打开流动检测池上盖。
2.关闭液流。
3.选择“Instument>Fluidics Shutdown(关闭液流系统)”选项
4.出现以下提示信息时,在进样管中装入越1ml洗液,放于载物 台上,单击OK。
5.在进样管中加约1尘濒去离子水,放于载物台上,然后单击翱碍。
6.看到“系统已关闭”信息时,单击翱碍。
7.退出BD FACSDiva软件,关闭计算机。
8.关闭激光器电源,关闭仪器主电源,关闭稳压电源。